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细菌超声分散计数仪

时间:2017-08-29来源:微信公众号:结核汇 点击: 百度搜索

【导读】细菌超声分散计数仪是一款用于分散各种微生物的实验设备,尤其对呈颗粒状、菜花状生长的结核分枝杆菌菌落,分散效果尤为显著;同时分散后可实现自动比浊,智能提示稀释到标准麦氏浊度......
TAG标签: 微生物实验 前处理 分散计数仪

简介:

细菌超声分散计数仪是一款用于分散各种微生物的实验设备,尤其对呈颗粒状、菜花状生长的结核分枝杆菌菌落,分散效果尤为显著;同时分散后可实现自动比浊,智能提示稀释到标准麦氏浊度所需的稀释体积,是临床及科研微生物实验中菌悬液制备的新型有效工具。

传统的菌悬液制备方法以反复吹打、涡旋震荡为主。开放式操作,容易产生大量的气溶胶,无法为实验人员的健康安全提供充足的保障。另外,在临床及科研微生物实验中,经常遇到某些培养形态呈颗粒状、皱褶干燥、粘稠拉丝、难分离的菌株,比如诺卡菌属、奈瑟菌属、肺炎克雷伯菌、铜绿色假单胞菌等等。通过对比传统的吹打混匀与新型的超声分散这两种处理方法,从革兰氏染色镜检比较两种方法的微观分散效果,并用平板计数法评价超声分散处理对细菌活性影响,从而探究细菌超声分散计数仪能否替代传统手工方法。

微生物菌株:大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、鲍曼不动杆菌、玫瑰单胞菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、人苍白杆菌、嗜麦芽窄食单孢菌、肠球菌、奈瑟菌属、BCG菌、耻垢分枝杆菌、琼氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌、诺卡菌属。

方法

A.仪器处理组:用接种环从已分离鉴定的细菌培养基上挑取少许细菌菌团加入预装2mL生理盐水的试管中,把样品放入细菌超声分散计数仪中。根据表1《细菌超声分散计数仪应用参数对照表》,对仪器进行参数设定并运行,根据仪器提示制备成1MCF菌悬液。

B.手工分散组:用移液器反复吹打溶液,使菌团均匀分散于溶液中,并用仪器检测制备成1MCF菌悬液。

C.将1MCF菌悬液按10倍梯度稀释至1106,取11051106稀释菌液,每个稀释度分别取10ul菌液涂布3个固体琼脂培养平板,并放置于37℃培养箱培养24-48小时,分别统计两种处理方法的平板菌落数。

表1:细菌超声分散计数仪应用参数对照表

革兰氏染色镜检

表2:列举数种细菌在两种分散方法下革兰氏染色镜检

通过显微镜,能明显观察到细菌超声分散计数仪处理后的菌液均匀度更佳,无明显菌团聚现象。

平板计数

每种菌株至少完成两次以上重复实验,每次实验各组至少安排3个重复对照

*参考来源:《有效活菌数的测定方法、允许差与判定》-农业部微生物肥料质检中心,李元芳

表3:不同类型细菌在两种分散方法下的平板菌落数结果统计

十种细菌在两种分散处理方法下,相同稀释度的菌落数基本处于相同水平,两组差值均在允许误差范围内,说明细菌超声分散计数仪处理对细菌活性无显著影响。

表4:不同菌株超声分散时间与对应浊度值变化趋势图

从上图可以看出绝大多数菌株在推荐的超声分散时间内,菌悬液浊度值达到最大,间接提示在一定时间内超声分散,在保证菌活性不受影响的同时,菌悬液分散效果最理想。

结论

通过上述试验,细菌超声分散计数仪能更便捷地制备出分散效果更理想的菌菌悬液,同时不会影响细菌的生长活性。过去面对如诺卡菌属、奈瑟菌属、肺炎克雷伯菌、铜绿色假单胞菌等难以处理的菌株,需要用到反复吹打混匀、研磨震荡、离心过滤等方法,但效果均不甚理想。现在我们为您提供一款新工具,细菌超声分散计数仪,希望能为微生物实验提供一套安全、高效、标准化的解决方案。

(责任编辑:Labtoday)
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